根據(jù)實驗物種及待檢樣品性質來選擇
科研ELISA試劑盒如果實驗君的實驗樣品為人、小鼠或大鼠樣品,那么要選擇一個合適的試劑盒相對容易,但如果您的實驗樣品來源于其他物種如雞、牛、猴等,則市面上能提供的試劑盒種類卻很少。且不可輕信能提供近萬種試劑盒,覆蓋多物種的供應商。但如果又非要檢測這些物種的指標時,要對待檢物(如有種屬差異性)進行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應數(shù)據(jù)。對于樣品類型而言,一般的商業(yè)化試劑盒都經過血清、血漿和細胞培養(yǎng)上清液的驗證。在選擇試劑盒時,要詳細閱讀說明書,比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外,在某些情形下樣品中會存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體(HAMA)、細胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因此需根據(jù)樣品來選擇試劑盒,必要時還要根據(jù)樣本來適當優(yōu)化?;蛟跇悠肥占?,先閱讀一些可靠供應商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細胞裂解物,則需要更謹慎的選擇試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經過多種來源組織樣本的驗證。這需要實驗君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對,都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白,還要考慮組織樣品的基質效應(Matrix Effect)等。但如果實驗君要了解組織樣品的制備問題,我們另起一文來總結。
根據(jù)樣品中檢測物水平來選擇
科研ELISA試劑盒如果實驗君對于樣品中待檢物的水平沒有任何可參考的數(shù)據(jù),選擇寬動力學檢測范圍的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低,建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了降低基質效應,有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠超過試劑盒的檢測范圍(標曲范圍), 也需做適當?shù)谋稊?shù)稀釋。在zui后計算結果時,需乘以相應的稀釋倍數(shù)。
根據(jù)樣本可獲得性來選擇科研ELISA試劑盒
通常而言,商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應商的試劑盒對樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很珍貴或較難獲取,則需要認真考慮試劑盒對樣品用量的要求。如果樣品量少,且要做多因子檢測時更需謹慎。
細致比較科研ELISA試劑盒關鍵性技術參數(shù)
ELISA試劑盒的關鍵技術參數(shù)包括板內差異性、板間差異性、批間差異性、重復性、特異性及交叉反應性、回收率等。如果實驗君經常開展ELISA實驗,建議使用同一廠家的試劑盒,這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復性(當然前提是實驗條件的一致性)。對于科研用的定量ELISA試劑盒,不同的生產廠家使用的抗體對、酶以及底物、生產工藝和研發(fā)實力不盡相同,自然不同廠家試劑盒測出的數(shù)據(jù)會有差異。